Iedereen weet dat er veel laboratoria zijn, dus hoeveel mensen kennen PCR-laboratoria? En wat zijn de basisvereisten voor het ontwerpen van PCR-laboratoria? Dan zal er VOLAB Xiaobian zijn om met iedereen te bespreken~
1, PCR-laboratoriumindeling
Het PCR-amplificatietestlaboratorium is in principe verdeeld in vier afzonderlijke werkgebieden: opslag- en voorbereidingsruimte voor reagentia, ruimte voor monstervoorbereiding, voorbereidings- en amplificatieruimte voor het amplificatiereactiemengsel en analyseruimte voor amplificatieproducten. Om kruisbesmetting- te voorkomen, moet het betreden van elk werkgebied strikt één richting volgen, dat wil zeggen, alleen vanuit de opslag- en voorbereidingsruimte voor reagentia → monstervoorbereidingsruimte → bereidings- en amplificatieruimte voor amplificatiereactiemengsel → analyseruimte voor amplificatieproducten. De overdracht van reagentia en monsters tussen elke experimentele zone moet plaatsvinden via een overdrachtsvenster.
2. Ontwerp en drukregeling van laboratoriumairconditioningventilatiesystemen
PCR-laboratoria stellen geen strikte zuiveringseisen, maar om de mogelijkheid van kruisbesmetting-tussen de verschillende proefruimtes te voorkomen, is het raadzaam een luchtdistributiesysteem met volledige-stroom te gebruiken. Tegelijkertijd moet de verhouding tussen zenden en uitputten strikt worden gecontroleerd om de drukvereisten van elk experimenteel gebied te garanderen.
2.1, monstervoorbereidingsgebied
De belangrijkste werkzaamheden op dit gebied zijn het conserveren van monsters, het extraheren van nucleïnezuren (RNA, DNA), het bewaren en toevoegen ervan aan amplificatiereactiebuizen en het bepalen van de DNA-synthese. De drukgradiëntvereisten in dit gebied zijn: positieve druk ten opzichte van het aangrenzende gebied om aërosolverontreiniging vanuit het aangrenzende gebied naar dit gebied te voorkomen. Bovendien moet, vanwege de mogelijkheid van aërosol-geïnduceerde besmetting tijdens het laden, onnodig lopen in de omgeving worden vermeden.
2.2. Opslag- en voorbereidingsruimte voor reagentia
De belangrijkste werkzaamheden op dit experimentele gebied zijn de bereiding van opslagreagentia, het doseren van reagentia en de bereiding van de belangrijkste reactiemengsels. Reagentia en materialen die worden gebruikt voor monstervoorbereiding moeten rechtstreeks naar dit gebied worden verzonden en mogen niet via andere gebieden worden getransporteerd. Reagensgrondstoffen moeten in deze ruimte worden opgeslagen en in de ruimte worden voorbereid tot de benodigde opslagreagentia. Er zijn geen strenge eisen voor de controle van de luchtdruk.
2.3, analysegebied voor amplificatieproducten
De belangrijkste operatie op dit gebied is de bepaling van geamplificeerde fragmenten. Dit gebied is de belangrijkste bron van besmetting van het versterkte product. Daarom zijn de drukgradiëntvereisten voor dit gebied: Negatieve druk ten opzichte van het aangrenzende gebied om diffusie van versterkte producten van het gebied naar andere gebieden te voorkomen.
2.4, bereiding van amplificatiereactiemengsel en amplificatiezone
De belangrijkste operatie op dit gebied is DNA-amplificatie. Bovendien kan in dit gebied ook de toevoeging van het voorbereide DNA-sjabloon (uit de monstervoorbereidingsruimte) en het hoofdreactiemengsel (uit de reagensopslag- en voorbereidingsruimte) worden uitgevoerd om een reactiemengsel enz. te bereiden. De drukgradiëntvereisten in dit gebied zijn: negatieve druk ten opzichte van het aangrenzende gebied om aerosollekkage uit het gebied te voorkomen. Om vervuiling veroorzaakt door aerosolen te voorkomen, moet onnodig wandelen in het gebied tot een minimum worden beperkt. Individuele handelingen zoals bemonstering moeten op de schone bank worden uitgevoerd.
3.1. Strikte verdeling van werkgebied
(1) De setting van elk experimentgebied is redelijk;
(2) Elk experimentgebied moet duidelijke markeringen hebben (zoals opvallende huisnummers of verschillende grondkleuren, enz.) om verwarring tussen apparatuuritems en reagentia in verschillende experimentele gebieden te voorkomen.
3.2, redelijke systeeminstellingen
(1) Redelijke instelling van het ventilatiesysteem voor airconditioning-, probeer het volledige-airconditioningsysteem- te gebruiken;
(2) Een strikte controle van de luchtstroomdruk zorgt voor verschillende drukvereisten in verschillende experimentele gebieden.
3.3, de standaardwerking
(1) De technici van het amplificatie-inspectielaboratorium moeten praktijkgerichte training geven en kunnen alleen deelnemen aan klinische genamplificatietests nadat ze de training hebben behaald;
(2) Tijdens de experimentele operatie moet de operator handschoenen dragen en deze regelmatig vervangen. Daarnaast is ook het gebruik van wegwerpdoppen tijdens het gebruik een effectieve maatregel om besmetting te voorkomen;
(3) De schoonmaakwerkzaamheden zijn tijdig en correct. Nadat het experiment is voltooid, moet het gebied onmiddellijk worden schoongemaakt. Naast de conventionele desinfecterende vloeistoffen voor de desinfectie van oppervlakken of de bestraling en desinfectie van ultraviolette lampen, zou sommige experimentele apparatuur ook moeten worden onderworpen aan hogedruksterilisatie.
3.4, strikt beheer
(1) Houd strikt toezicht op het personeel dat het laboratorium binnenkomt en verlaat. Personen die geen verband houden met het experiment mogen het laboratorium niet naar eigen goeddunken betreden of verlaten, en indien nodig moeten zij onafhankelijke doorgangen en deuren van en naar het gehele experimentele gebied opzetten.
(2) Minimaliseer onnodig lopen in het experimentele gebied om de kans op kruisbesmetting- te verkleinen.
(3) Het analysegebied van het versterkte product is de belangrijkste bron van besmetting van het versterkte product. De afvaloplossing mag niet in het laboratorium worden gedumpt. Het moet in de desinfecterende oplossing worden gedrenkt en vervolgens op een plaats buiten het laboratorium worden weggegooid. De gebruikte tips zijn wegwerpbaar. Ook dienen de materialen gedesinfecteerd en gesteriliseerd te worden en vervolgens uniform behandeld te worden, zoals verbranding;
(4) Het analysegebied voor amplificatieproducten kan gebruik maken van bepaalde genmutaties en toxische stoffen, en er moet speciale aandacht worden besteed aan de veiligheidsbescherming van de experimentator.
3.5. Volledige laboratoriumfaciliteiten
Volledige laboratoriumondersteunende faciliteiten zijn noodzakelijke voorwaarden om het experimentele werk te garanderen. De bijbehorende apparatuur en instrumenten moeten worden uitgerust in overeenstemming met de verschillende experimentele inhoud van elk laboratorium, zoals ultra-schone banken, centrifuges en monstervoeders.